НОВОСТИ   БИБЛИОТЕКА   ЭКЗАМЕН ПО АНАТОМИИ   ЭКЗАМЕН ПО ПАТОЛОГИИ   О САЙТЕ  





предыдущая главасодержаниеследующая глава

Патология системы крови

Занятие 20. Анемии

Цель занятия

Рассмотреть основные сдвиги в периферической крови при экспериментальных гемолитической (фенилгидразиновой) и постгеморрагической анемиях у кроликов.

Подготовка к занятию

Студенты готовятся к данному занятию в объеме следующих вопросов.

1. Представление о нормобластическом и мегалобластическом типах кровотворения.

2. Понятие об анемиях, их классификация: а) по цветному показателю; б) по степени и качеству регенерации красных кровяных элементов; в) по величине эритроцитов; г) по типу эритропоэза.

3. Классификация анемий по важнейшим этиологическим и патогенетическим показателям: а) пернициозная анемия, ее этиология и патогенез; картина периферической крови; б) гемолитическая и постгеморрагическая анемии; наблюдающиеся при них качественные и количественные изменения эритроцитов, функциональная характеристика костного мозга.

4. Техника подсчета эритроцитов, определение гемоглобина, вычисление цветного показателя, изготовление и окраска мазка крови, прижизненная окраска ретикулоцитов и их подсчет. Оценка качественных изменений эритроцитов в окрашенном мазке.

Техническое оснащение занятия*

* (На группу в 12 человек.)


На каждого студента
На каждого студента

В начале занятия студенты знакомятся с характерными особенностями гематологической картины при различных анемических состояниях по цветным таблицам. Находят в мазках, выставленных заранее под микроскопом, наиболее типичные для анемии клетки крови и зарисовывают их в тетради.

Наименование опытов и методика их проведения

Опыт 1. Экспериментальная гемолитическая анемия у кролика. За 3-4 дня до занятия в течение 2 дней под кожу спины кролика вводят 3% раствор солянокислого фенилгидразина из расчета 0,5 мл на 1 кг веса, в результате чего к моменту занятия у кролика развивается гемолитическая анемия. Студенты определяют в крови, взятой из краевых вен ушей подопытного и контрольного кроликов, количество эритроцитов в 1 мм3, содержание гемоглобина; вычисляют цветной показатель; изготовляют прижизненно окрашенные мазки, подсчитывают количество ретикулоцитов на 1000 эритроцитов; красят фиксированные мазки и зарисовывают характерные картины крови.

Опыт 2. Экспериментальная постгеморрагическая анемия у кролика. За месяц до занятия у кролика производят повторные (10-15 раз) кровопускания, каждый раз выпуская по 10-12% объема крови (принято считать, что объем крови эквивалентен 1/16 веса тела).

Острую постгеморрагическую анемию можно вызвать путем однократного кровопускания. При этом берут 40-50% объема крови за 2 дня до занятия.

Методика подсчета количества эритроцитов

Из прокола краевой вены предварительно обработанного эфиром уха кролика набирают в эритроцитарный меланжер (рис. 16) кровь до метки 0,5 и разводят до метки 101 1% раствором поваренной соли (разведение в 200 раз). В течение 2-3 минут меланжер встряхивают (рис. 17). Затем 5-ю или 6-ю каплю смеси из меланжера помещают под заранее притертое покровное стекло счетной камеры (рис. 18, 19). Эритроциты подсчитывают в 5 больших (т. е. в 80 малых) квадратах сетки Горяева (рис. 20, 21).

Рис. 16. Эритроцитарный меланжер
Рис. 16. Эритроцитарный меланжер

Рис. 17. Встряхивание меланжера
Рис. 17. Встряхивание меланжера

Рис. 18. Схематическое изображение камеры для подсчета форменных элементов крови. 1 - вид сбоку; 2 - вид сверху
Рис. 18. Схематическое изображение камеры для подсчета форменных элементов крови. 1 - вид сбоку; 2 - вид сверху

Рис. 19. Помещение капли смеси в камеру
Рис. 19. Помещение капли смеси в камеру

Рис. 20. Сетка Горяева и порядок передвижения сетки при подсчете эритроцитов (А) и лейкоцитов (Б)
Рис. 20. Сетка Горяева и порядок передвижения сетки при подсчете эритроцитов (А) и лейкоцитов (Б)

Рис. 21. Порядок подсчета эритроцитов в пределах большого квадрата
Рис. 21. Порядок подсчета эритроцитов в пределах большого квадрата

По числу эритроцитов, имеющихся в 80 малых квадратах, вычисляют количество их в 1 мм3 крови. Для вычисления пользуются формулой:


где х - искомое количество эритроцитов;

а - сумма эритроцитов, сосчитанных в 5 больших квадратах;

б - количество сосчитанных малых квадратов;

в - разведение крови (в 200 раз);

4000 - множитель, приводящий объем столбика жидкости в границах малого квадрата (1/4000 мм3) к 1 мм3.

Пример. В 5 больших квадратах (80 малых) сосчитано 456 эритроцитов.


т. е. сумму эритроцитов, сосчитанных в 5 больших квадратах, нужно умножить на 10000.

Для подсчета эритроцитов можно воспользоваться безмеланжерным методом. При этом кровь берут микропипеткой от гемометра (до метки 0,02 мл) и выдувают в пробирку с 3,98 мл 1 % раствора хлористого натрия. После промывания пипетки смесь тщательно встряхивают. Каплю смеси стеклянной палочкой или пипеткой для дистиллированной воды от гемометра вносят в счетную камеру.

Данный метод дает более точные результаты.

Определение количества гемоглобина

В мерную пипетку от гемометра набирают 0,02 мл крови и осторожно выдувают на дно градуированной пробирки, в которую заранее помешают децинормальный раствор соляной кислоты до цифры 2 на шкале грамм-процентов (г %). Мерную пипетку трижды промывают соляной кислотой; смесь встряхивают и оставляют стоять в течение 5 минут. Образующийся солянокислый гематин окрашивает содержимое пробирки в коричнево-желтый цвет. Прибавлением дистиллированной воды выравнивают цвет жидкости в средней пробирке с цветом эталона и получают ответ в грамм-процентах (г %) или единицах (%).

Вычисление цветного показателя

По цветному показателю судят о степени насыщенности гемоглобином каждого эритроцита. За единицу цветного показателя принято 33 μν (микрогаммы) гемоглобина, который находится в эритроците при условии полного его насыщения. Цветной показатель вычисляется по формуле:


Пример: Найдено, что в крови содержится 85 единиц Нb, в 1 мм3 крови - 4560000 эритроцитов.

При этом:


Можно также запомнить упрощенную формулу вычисления цветного показателя: "цветной показатель равен содержанию гемоглобина в процентах, деленному на удвоенные первые две цифры числа эритроцитов (при числе эритроцитов менее миллиона берется только первая цифра)". Применив эту формулу в нашем примере, получим:


Изготовление прижизненно окрашенного мазка и подсчет ретикулоцитов

На предметное стекло с заранее нанесенной краской бриллиант-крезилблау (1 г краски на 80 г этилового спирта) наносят мазок крови и тотчас (!) помещают на 6-8 минут во влажную камеру. Затем мазок извлекают из камеры, высушивают и рассматривают под иммерсией. Ретикулоциты отличаются от обычных эритроцитов наличием базофильной ретикулярной субстанции.

Для облегчения подсчета ретикулоцитов используют счет с окошечком (рис. 22). Из бумаги вырезают кружок по размерам окуляра микроскопа. В центре кружка прорезают отверстие размером 1,5×1,5 мм. Кружок, вложенный в окуляр, ограничивает поле зрения и тем самым значительно облегчает счет. Осторожно передвигая мазок, сосчитывают 1000 клеток и определяют приходящееся на них количество ретикулоцитов. В целях экономии времени на студенческом занятии допустим подсчет меньшего количества клеток (200-300).

Рис. 22. Последовательность приготовления окошечка для подсчета ретикулоцитов
Рис. 22. Последовательность приготовления окошечка для подсчета ретикулоцитов

Изготовление окрашенного мазка и изучение картины периферической крови

На предметное стекло наносят тонкий мазок крови, который после высыхания фиксируют в течение 3 минут в метиловом спирте и заливают на 20-25 минут свежеприготовленной краской Гимза (1 мл спиртового раствора краски Гимза на 9 мл дистиллированной воды). Краску смывают водопроводной водой. Излишек влаги удаляют фильтровальной бумагой, мазок сушат и рассматривают с иммерсией. Студенты зарисовывают картину периферической крови у интактного и анемизированного кроликов (рис. 23).

Рис. 23. Последовательность изготовления мазка крови
Рис. 23. Последовательность изготовления мазка крови

Все данные, полученные студентами, выписывают на доску, выводят средние показатели для контрольного анемизированного кролика. После совместного обсуждения результатов опыта с преподавателем студенты делают соответствующее заключение по данному занятию в своих протоколах.

предыдущая главасодержаниеследующая глава

















© Злыгостев Алексей Сергеевич, 2011-2019
При использовании материалов сайта активная ссылка обязательна:
http://anfiz.ru/ 'AnFiz.ru: Анатомия и физиология человека'