Патология тканевого роста

Занятие 19. Опухоли

Цель занятия

Изучить основные методы перевивок опухолей в эксперименте: а) метод перевивки взвесью опухолевой ткани; б) метод перевивки кусочком опухоли. Исследовать изменение реактивности животных с опухолями к симпатикомиметическим веществам.

Подготовка к занятию

Студенты готовятся к данному занятию в объеме следующих вопросов.

1. Методы экспериментального воспроизведения опухолей: а) метод трансплантации (гомо-гетеротрансплантапия - трансплантация клетками и бесклеточным фильтратом; б) метод эксплантации; в) метод индуцирования опухолей химическими и физическими агентами (канцерогенными веществами, лучистой энергией).

2. Значение экспериментального метода в изучении этиологии и патогенеза опухолей.

^* (Из расчета на рабочее место для 2-3 студентов.)

Наименование опытов и методика их проведения

Опыт 1. Трансплантация опухоли крысам:

а) Кусочком бластомной ткани. Работа проводится с соблюдением правил асептики. Двух крыс (интактную и с саркомой штамма М-1 или др.) привязывают к операционным столикам. Крысу с саркомой привязывают опухолью кверху, интактную - спиной кверху. Подготавливают операционное поле: у больной крысы в области опухоли, а у интактной на спине выстригают шерсть и смазывают настойкой йода. Один из студентов моет руки к операции, другой наркотизирует крыс эфиром. Стерильный инструмент раскладывают на стерильном полотенце. Ножницами разрезают кожу у интактной крысы на спине длиной в 1 см. Отсепаровывают скальпелем кожу и пинцетом делают небольшой подкожный карман глубиной в 1-1,5 см. У крысы с опухолью производят длинный разрез кожи вдоль всей опухоли; отсепаровывают кожу и выделяют опухоль.

Опухоль помещают в стерильную чашку Петри.

Вырезают маленький кусочек из периферического участка опухоли (без некроза!) размером 1,5 × 3 мм, который вводят через имеющийся разрез у интактной крысы в подкожный карман. На кожу накладывают швы. Место разреза смазывают настойкой йода. Наблюдая животное в последующие дни после перевивки, отмечают появление первичного опухолевого узелка, постепенный рост опухоли, ее изъязвление, развитие кахексии и гибель крысы.

б) Эмульсией бластомной ткани. Работа проводится на крысах с соблюдением правил асептики. Вырезают участки опухоли, свободные от некроза, помещают в чашку Петри и промывают физиологическим раствором для освобождения от крови. Тщательно размельчив опухолевую ткань ножницами до образования гомогенной массы, проходящей через просвет толстой иглы, разбавляют ее пополам стерильным физиологическим раствором (рис. 15).

Рис. 15. Приготовление взвеси опухолевой ткани (в чашках Петри)

Приготовленную взвесь набирают в шприц и через короткую с широким просветом иглу вводят под кожу интактной крысе. (На месте инъекции кожу предварительно освобождают от шерсти; до и после инъекции кожу смазывают настойкой йода.)

В последующие дни отмечают появление первичного опухолевого узелка, наблюдают постепенный рост, распад и изъязвление опухоли, развитие кахексии и гибель крысы.

Опыт 2. Перевивка асцитной формы карциномы Эрлиха мышам. Мышь с асцитной карциномой Эрлиха фиксируют, ее переднюю брюшную стенку смазывают спиртом. Стерильным шприцем (на 2 мл) с тонкой иглой из брюшной полости извлекают 0,25 мл асцитической жидкости (в ней содержатся раковые клетки).

0,2 мл асцитической жидкости инъецируют в брюшную полость интактной мыши (из оставшейся в шприце жидкости готовят мазок). В последующие дни в брюшной полости мыши накапливается асцитическая жидкость (5-15 мл). Такие мыши погибают обычно на 7-21-й день после перевивки.

Опыт 3. Микроскопическое исследование асцитной формы карциномы Эрлиха мышей. Приготовленный ранее мазок (см. опыт 2) окрашивают по Романовскому - Гимзе и исследуют под микроскопом: сначала под малым, а затем под большим увеличением (окуляр 10, объектив 90) с помощью иммерсионной системы. Отмечают атипизм деления клеток:

а) частые митозы и амитозы;

б) деление ядер без деления протоплазмы;

в) образование карликовых и гигантских клеток;

наблюдают также отпочкование протоплазматических шаров.

Опыт 4. Опухоли, индуцированные канцерогенными веществами (демонстрация). Двум группам крыс или мышей (по 10-25 животных в каждой группе) за 3 и 4 месяца до занятия вводят внутримышечно (в область бедра) или подкожно 0,5% взвесь 9,10-диметил-1,2-бензантрацена в оливковом масле (крысе 0,6 мл взвеси, т. е. 3 мг канцерогена; мыши 0,2-0,1 мл взвеси, т. е. 1-0,5 мг канцерогена). К моменту занятия у большинства выживших животных на месте введения развиваются опухоли. Демонстрируют животных с опухолями на различных стадиях развития (первичный узел, образование большой опухоли, распад опухоли). Вместо 9,10-диметил-1,2-бензантрацена для индуцирования опухолей можно в указанные выше сроки ввести внутримышечно или подкожно 3,4-бензпирен из расчета: мыши - 2-3 мг, крысе - 5-6 мг.

Студенты наблюдают развитие опухолей и состояние животных в динамике в течение 3-6 недель. Результаты фиксируют в протоколе.

Опыт 5. Изменение чувствительности животных с опухолями к адреналину. Двум взрослым крысам - интактной и с перевивной саркомой (больших размеров!) вводят под кожу адреналин из расчета 1 мл 0,1 % раствора на 100 г веса животного. Наблюдают в течение 15-45 минут реакцию у обеих крыс, отмечают отличия. Погибшее животное вскрывают и определяют причину смерти.