Занятие 10. Фагоцитарная реакция при воспалении

Цель занятия

Изучить стадии развития фагоцитоза при воспалении.

Подготовка к занятию

Студенты готовятся к данному занятию в объеме следующих вопросов.

1. Фагоцитоз как защитная реакция организма при воспалении.

2. Учение И. И. Мечникова о воспалении.

3. Современные данные о механизме фагоцитарной реакции.

4. Связь фагоцитарной реакции с реактивностью организма.

^* (Из расчета на одну группу студентов.)

Для изучения фагоцитоза в висячей капле^*

^* (Из расчета на одного студента.)

Для изучения фагоцитоза в мазке

Наименование опытов и методика их проведения

Опыт 1. Фагоцитоз птичьих эритроцитов в брюшной полости морской свинки. В начале занятия берут заранее подготовленную морскую свинку (крысу), у которой в экссудате полости живота установлено скопление макрофагов. Выстригают шерсть по срединной линии кзади от пупка и шкуру протирают эфиром и йодной настойкой. Набирают в шприц 3 мл 3% взвеси эритроцитов петуха, подогретой до 38°, производят прокол иглой на 6-8 см кпереди от лонного сращения, строго по срединной линии живота, в положении животного вниз головой. При этом задние лапки животного оттягивают назад и в стороны. Взвесь эритроцитов вводят в полость живота не быстро и отмечают время введения.

Через 15 минут у подопытного животного ножницами надрезают кожу живота по срединной линии кзади от пупка; в месте надреза стерильной пастеровской пипеткой прокалывают брюшину и в пипетку набирают 1-1,5 мл экссудата. Для приготовления висячей капли переносят 5-7 капель экссудата на часовое стекло и смешивают с равным количеством капель краски нейтральной красной. Затем каждый студент изготовляет из экссудата мазок и препарат висячей капли. Через каждые 15-20 минут после первой пробы берут вторую и третью пробу экссудата и изготовляют мазки и препараты висячей капли. В промежутках между взятием проб экссудата фиксируют и окрашивают мазки, затем изучают картину фагоцитоза в висячей капле. Мазки изучают после обработки третьей пробы. Картины фагоцитоза в каждой висячей капле и в каждом мазке зарисовывают и составляют протокол опыта.

1. На стекле с лункой делают непрерывный ободок из вазелина вокруг лунки. На протертое покровное стеклышко в центре помещают каплю экссудата, смешанного с индикатором нейтральный красный, величиной с булавочную головку. Покровное стеклышко накрывают стеклом с лункой так, чтобы капля проецировалась на середину лунки, но не прикасалась к ней. Затем весь препарат переворачивают покровным стеклом вверх, при этом капля экссудата повисает над лункой. Вазелиновый ободок обеспечивает герметичность лунки, чем предупреждается высыхание капли.

2. При малом увеличении микроскопа с суженной диафрагмой или с опущенным конденсатором отыскивают край капли и на фоне желтовато-зеленых овальных эритроцитов находят красный комочек и помещают его в центр поля зрения, после чего устанавливают большое увеличение (объектив 40).

3. Теперь красный комочек предоставляется макрофагом, внутри которого видны ярко-красные эритроциты. В зависимости от стадии фагоцитоза макрофаг может фиксировать на своей поверхности до 10-20 эритроцитов (желто-зеленого цвета), внутри макрофага будут находиться то цельные эритроциты, то их ядра, окруженные тонким ободком протоплазмы, то, наконец, лишь обломки ядер и зерна. В процессе ферментолиза поглощенные эритроциты окрашивают в присутствии индикатора нейтральный красный в розовый, а затем в рубиново-красный цвет, что указывает на изменение реакции в кислую сторону. Эритроциты нефагоцитированные, а также свободные от эритроцитов макрофаги своей обычной окраски не меняют.

1. Небольшую каплю экссудата помещают на предметное стекло на сантиметр от его узкого края и шлифованным ребром другого стекла делают длинный и широкий мазок. Высохший мазок помещают на решетку ванночки и заливают краской Май-Грюнвальда на 5 минут, затем добавляют приблизительно равное количество дистиллированной воды и мазок докрашивают еще в течение 3-5 минут. В первой фазе окрашивания необходимо подливать краску дополнительно, так как она быстро испаряется (иначе мазок будет испорчен). По окончании окрашивания краску сливают в ванночку, мазок промывают водопроводной водой и высушивают полосками фильтровальной бумаги^*.

^* (При других методах окраски высохший мазок предварительно фиксируют 3 минуты в метиловом алкоголе, а затем окрашивают.)

2. Высушенный мазок рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой. В мазке определяют все фазы фагоцитоза и зарисовывают их.